FetuinA胎球蛋白AELISA試劑盒

我司提供的試劑僅供研究使用       

實驗?zāi)康模?/span>

本試劑盒用于測定人血清、血漿、組織勻漿及相關(guān)液體樣本中FetuinA胎球蛋白A的含量。

實驗原理：

上海試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)吸附試驗（ELISA）。往預(yù)先包被FetuinA胎球蛋白A的包被微孔中，依次加入標(biāo)本、標(biāo)準(zhǔn)品、HRP標(biāo)記的檢測抗體，經(jīng)過溫育并洗滌。用底物TMB顯色，TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成終的黃色。顏色的深淺和樣品中FetuinA胎球蛋白A呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm 波長下測定吸光度（OD 值），計算樣品濃度

試劑盒組成：

操作步驟：

胎球蛋白A試劑盒方法一　用于檢測未知抗原的雙抗體夾心法:

1.　包被：用0.05M PH9.牰碳酸鹽包被緩沖液將抗體稀釋至蛋白質(zhì)含量為1～10μg／ml。在每個聚板的反應(yīng)孔中加0.1ml，4℃過夜。次日，棄去孔內(nèi)溶液，用洗滌緩沖液洗3次，每次3分鐘。(簡稱洗滌，下同)。

2.　加樣：加一定稀釋的待檢樣品0.1ml于上述已包被之反應(yīng)孔中，置37℃孵育1小時。然后洗滌。(同時做空白孔，陰性對照孔及陽性對照孔)。

3.　加酶標(biāo)抗體：于各反應(yīng)孔中，加入新鮮稀釋的酶標(biāo)抗體(經(jīng)滴定后的稀釋度)0.1ml。37℃孵育0.5～1小時，洗滌。

4.　加底物液顯色：于各反應(yīng)孔中加入臨時配制的TMB底物溶液0.1ml，37℃10～30分鐘。

5.　終止反應(yīng)：于各反應(yīng)孔中加入2M0.05ml。

6.　結(jié)果判定：可于白色背景上，直接用肉眼觀察結(jié)果：反應(yīng)孔內(nèi)顏色越深，陽性程度越強(qiáng)，陰性反應(yīng)為無色或極淺，依據(jù)所呈顏色的深淺，以“+”、“-”號表示。也可測O·D值：在ELISA檢測儀上，于450nm(若以ABTS顯色，則410nm)處，以空白對照孔調(diào)零后測各孔O·D值，若大于規(guī)定的陰性對照OD值的2.1倍，即為陽性。

　　胎球蛋白AELISA方法二　用于檢測未知抗體的間接法：　　　

　　用包被緩沖液將已知抗原稀釋至1～10μg／ml，每孔加0.1ml，4℃過夜。次日洗滌3次。加一定稀釋的待檢樣品(未知抗體)0.1ml于上述已包被之反應(yīng)孔中,置37℃孵育1小時,洗滌。(同時做空白、陰性及陽性孔對照)于反應(yīng)孔中，加入新鮮稀釋的酶標(biāo)第二抗體(抗抗體)0.1ml，37℃孵育30-60分鐘，洗滌,后一遍用DDW洗滌。其余步驟同“雙抗體夾心法”的4、5、6。

注意事項：

1.　正式試驗時，應(yīng)分別以陽性對照與陰性對照控制試驗條件，待檢樣品應(yīng)作一式二份，以實驗結(jié)果的準(zhǔn)確性。有時本底較高，說明有非特異性反應(yīng)，可采用羊血清、兔血清或BSA等封閉。

2.　在酶聯(lián)ELISA試劑盒中，進(jìn)行各項實驗條件的選擇是很重要的，其中包括:

(1)　固相載體的選擇：許多物質(zhì)可作為固相載體，如聚、聚、聚丙酰胺和纖維素等。其形式可以是凹孔平板、試管、珠粒等。目前常用的是40孔聚凹孔板。不管何種載體，在使用前均可進(jìn)行篩選：用等量抗原包被，在同一實驗條件下進(jìn)行反應(yīng)，觀察其顯色反應(yīng)是否均一性，據(jù)此判明其吸附性能是否良好。

　?。?) 包被抗體(或抗原)的選擇：將抗體(或抗原)吸附在固相載體表面時，要求純度要好,吸附時一般要求PH在9.0～9.6之間。吸附溫度，時間及其蛋白量也有一定影響,一般多采用4℃18～24小時。蛋白質(zhì)包被的適濃度需進(jìn)行滴定：即用不同的蛋白質(zhì)濃度(0.1、1.0和10μg／ml等)進(jìn)行包被后，在其它試驗條件相同時，觀察陽性標(biāo)本的OD值。選擇OD值大而蛋白量少的濃度。對于多數(shù)蛋白質(zhì)來說通常為1～10μg／ml。

(3)　酶標(biāo)記抗體工作濃度的選擇：用直接ELISA檢測試劑盒法進(jìn)行初步效價的滴定(見酶標(biāo)記抗體部份)。然后再固定其它條件或采取“方陣法”(包被物、待檢樣品的參考品及酶標(biāo)記抗體分別為不同的稀釋度)在正式實驗系統(tǒng)里準(zhǔn)確地滴定其工作濃度。

(4)　酶的底物及供氫體的選擇：對供氫體的選擇要求是、安全、有明顯地顯色反應(yīng)，而本身無色。有些供氫體(如OPD等)有潛在的致癌作用，應(yīng)注意防護(hù)。有條件者應(yīng)使用不致癌、靈敏度高的供氫體，如TMB和ABTS是目前較為滿意的供氫體。底物作用一段時間后，應(yīng)加入強(qiáng)酸或強(qiáng)堿以終止反應(yīng)。通常底物作用時間，以10-30分鐘為宜。底物使用液新鮮配制，尤其是H2O2在臨用前加入。

公司正在出售的產(chǎn)品：

小鼠腫瘤壞死因子受體超家族成員4(TNFRSF4)ELISA試劑盒 ，英文名： TNFRSF4 ELISA Kit

IL18RAP重組食蟹猴 IL18RAP 蛋白 (His 標(biāo)簽) Protein

IL13RA2重組狗 IL13RA2 / IL13R 蛋白 (His 標(biāo)簽) Protein

組織游離氨基酸含量熒光定量檢測試劑盒20

MouseBonemorphogeneticprotein2,BMP-2ELISA試劑盒小鼠骨成型蛋白2(BMP-2)ELISA試劑盒

HumanPoliomyelitisVirus,PV-IgGELISA試劑盒人脊髓灰質(zhì)炎病毒IgG(PV-IgG)ELISA試劑盒

MouseHelicobacterpyloriIgG,Hp-IgGELISAKit小鼠幽門螺旋菌IgG(Hp-IgG)ELISA試劑盒

MAP1LC3B Protein Human 重組人 LC3B / MAP1LC3B 蛋白 (His 標(biāo)簽)

PHOSPHO1 Protein Human 重組人 PHOSPHO1 蛋白 (His 標(biāo)簽)

TNFRSF17重組小鼠 TNFRSF17 / BCMA 蛋白 (Fc 標(biāo)簽) Protein

IGSF11 Protein Human 重組人 IGSF11 / BTIGSF 蛋白 (His 標(biāo)簽)

MouseEsadiolreceptor,ERELISA試劑盒小鼠雌二醇受體(ER)ELISA試劑盒

Rat oponin I (Tn- I) ELISA Kit 大鼠肌鈣蛋白Ⅰ(Tn-Ⅰ)ELISA試劑盒

皰疹病毒相關(guān)泛素特異性蛋白酶7抗體

鋅指蛋白830抗體

乳腺癌、胃癌抗原抗體GA55抗體  Anti-TACC1  WB IHC-P IHC-F IF  100ul

乙?；D(zhuǎn)移酶10抗體

考馬斯亮藍(lán)R250  進(jìn)口/國產(chǎn)

Ets轉(zhuǎn)錄因子家族ets1抗體

內(nèi)質(zhì)網(wǎng)脂質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)相關(guān)蛋白2抗體

三腺苷結(jié)合盒轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白4抗體

ART4重組小鼠 Art4 / CD297 蛋白 (Fc 標(biāo)簽) Protein

SEMA4A Protein Human 重組人 Semaphorin 4A / SEMA4A / Semaphorin B 蛋白 (Fc 標(biāo)簽)(Fc 標(biāo)簽)

FetuinA胎球蛋白AELISA試劑盒Humanaldehydedehydrogenase,ALDHELISAKit人乙脫氫酶(ALDH)ELISA試劑盒